Citometría
La Citometria de Flujo, es una técnica de análisis que se utiliza para medir múltiples parámetros en una sola célula. Esto permite caracterizar poblaciones celulares que cumplen funciones específicas en un proceso biológico. Junto a la citometría de flujo se desarrollo la tecnología para separar células vivas en base a los parámetros medidos por el citometro de flujo. Esto, constituye una poderosa herramienta para el estudio de diversas poblaciones celulares y está disponible en el mercado hace más de 20 años.
El Citómetro de Flujo de marca BD FACSJazz fue ajudicado en Noviembre del 2012 e instalado en la Unidad de Citometría del Instituto Antofagasta de la Universidad de Antofagasta el 11 de Septiembre del 2013. La puesta en marcha se inició el 01 de Noviembre del 2013 y estuvo funcional en todas sus capacidades en Octubre del 2014, por lo que se considera esta fecha, como el inicio de la puesta en marcha del proyecto FONDEQUIP EQM120137.
Actualmente, la Unidad de Citometría de Flujo viene prestando asistencia técnica y científica a todos los investigadores de la Universidad de Antofagasta que requieran del uso de la citometría o el sorting de poblaciones celulares.
Ficha Técnica
Citometro de Flujo Cell Sorter BD FACSJazz de la marca BECTON DIKINSON
Su sistema óptico (fuente de luz) esta compuesto por 2 lásers, que están alineados de forma independiente y permite evaluar hasta 6 parámetros distintos en la célula estudiada.
- Laser azul: Argón (488nm)
- Laser rojo: HeNe (640nm)
Su sistema óptico, está compuesto por espejos LonPass y filtros Bandpass. La luz emitida desde la celda de flujo es dirigida hacia dos detectores matrices, conocidos como Fotomultiplicadores (PMT). Este PMT está formado por un octágono que contiene 5 PMT, de las cuales 4 de ellas recoje las señales de dispersión de luz del laser azul (488nm) y 1 recoje las señales de dispersión lateral (SSC). Así mismo cuenta con un trígono que contiene 2 PMT y recoje las señales de dispersión de luz del laser rojo (640nm). Por otro lado, también cuenta con un Fotodiodo que recoje las señales de dispersión frontal o directa (FSC).
Los Filtros y detección de Fluorescencia son los siguientes:
Para el laser azul (488nm), 4 detectores: (530/40), (858/29), (692/40) y (750/LP). Los Fluorocromos utilizados son: FITC, GFP, PE, PI, PerCP-Cy5.5 y PE-Cy7.
Para el laser rojo (640nm), 2 detectores: (660/20) y (750/LP). Los Fluorocromos utilizados son: APC; APC-Cy7, APC-H7.
Dentro de la Electrónica digital, cuenta con una adquisión de 10.000 cel/seg.
El Software para el procesamiento y análisis de datos es el BD FACS Sortware sorter.
Protocolos disponibles
- Viabilidad Celular (por tinción del ADN con IP, Sybr-14, 7AAD)
- Ciclo Celular (por tinción del ADN con SYTOX, IP)
- Especies Reactivas de Oxígeno (ROS) (por tinción del ADN con DHE, SYTOX)
- Detección de Peroxinitrito mediante Dihydrorodamine 123 utilizando citometria
de flujo - Evaluación del Potencial de membrana mitocondrial mediante TMRM
- Determinación de oxidación del DNA mediante OxyDNA Assay Kit
- Determinación de la Fragmentación del DNA mediante método TUNEL
Procedimientos para el análisis de muestras
1.- Reunión de Planificación con los investigadores interesados en desarrollar sus experimentos utilizando la técnica de la Citometría de Flujo. Se brinda al investigador toda la información que requiera tanto en el uso del equipo como en la preparación de sus muestras.
2.- Se le brinda el soporte necesario a los investigadores durante el análisis de datos para guiarlos en la búsqueda de la información que se adquiere.
3.- Se le orienta a los investigadores en la forma más adecuada de visualizar y
seleccionar las poblaciones de interés, con la finalidad de que los datos obtenidos sean presentados y analizados de la forma más adecuada para la publicación de los datos.
Investigadores Usuarios de la Sala de Citometría
Actualmente contamos con usuarios de la Facultad de Ciencias de la Salud, la Facultad de Ciencias del Mar y Recursos Biológicos, del Instituto de Ciencias Naturales Alexander von Humboldt y del Instituto Antofagasta. El uso del equipo, ha sido definido por el proyecto de la siguiente manera:
Uso interno: al uso por personal técnico y alumnos tesistas dirigidos por investigadores de la Facultad de Ciencias de la Salud que formularon la propuesta y son los siguientes:
- PATRICIO MORALES RETAMAL
- LIDIA ZUÑIGA CONDOR
- EMILCE DIAZ LOIS
- JORGE GONZALES CORTES
- PEDRO ZAMORANO
Uso externo: al uso por personal técnico y alumnos tesistas dirigidos por investigadores que no formularon la propuesta. Entre ellos se incluye a investigadores del Instituto Antofagasta, Facultad de Ciencias de la Salud, Facultad de Ciencias del Mar y Recursos Biológicos, del Instituto de Ciencias Naturales Alexander von Humboldt y de otras Universidades de la Zona Norte de Chile y son los siguientes:
- JOSE LUIS VEGA PIZARRO
- BENITO GÓMEZ-SILVA
- CARLOS RIQUELME
- PEDRO ECHEVESTE DE MIGUEL
- MARIA RAQUEL RODRÍGUEZ MARTÍNEZ
Costo y Pago por el uso del Equipo
El uso del equipo tiene un costo, debido a que su funcionamiento requiere de calibración diaria y fluidos provistos por el distribuidor (BD Biosciences) y se detalla a continuación:
- Costo Citometría: 1 UF la primera hora + 0,16 UF la hora adicional.
- Costo Sorting: 1,5 UF la primera hora + 0,16 UF la hora adicional.
El pago por el uso del equipo consiste en que cada investigador debe contar con un proyecto vigente para realizar el pago con la reposición de insumos que requiere el equipo para su funcionamiento de acuerdo a su uso.
Dudas o consultas, escríbenos o llámanos
Contacto
labcitometria.ia@uamail.cl
+56 55 2513500 - Operadora - MSc. Marlene Zúñiga
+56 55 2637604 - Sala Citometría
Publicaciones donde se ha utilizado el equipo
Código DOI: 10.1016/j.ejbt.2021.09.001 Publicación: “Effect on growth and productivity of lutein from the chlorophyta microalga, strain MCH of Muriellopsis sp., when grown in sea water and outdoor conditions at the Atacama Desert”. Victoria Cruz-Balladares1*, Paola Marticorena1 and Carlos Riquelme1,2* 1Antofagasta Bioinnovation Center, University of Antofagasta 2Faculty of Marine Sciences and Biological Resources, University of Antofagasta.
Código DOI: 10.1007/s00248-021-01766-z Publicación: “Everything Is Everywhere: Physiological Responses of the Mediterranean Sea and Eastern Pacific Ocean Epiphyte Cobetia Sp. to Varying Nutrient Concentration”. Víctor Fernández-Juárez1., Daniel Jaén-Luchoro2,3., Jocelyn Brito-Echeverría4., Nona S. R. Agawin1., Antoni Bennasar-Figueras5. and Pedro Echeveste4,6. Received: 24 October 2020 /Accepted: 22 April 2021 The Author(s), under exclusive licence to Springer Science+Business Media, LLC, part of Springer Nature 2021. (Colaboración entre el Departamento de Biología de la Universidad de las Islas Baleares-Palma, España y el Instituto de Ciencias Naturales Alexander von Humboldt de la Universidad de Antofagasta, Chile).
Código DOI: 103389/fmicb.2020.00324 Publicación: “Haloterrigena sp. StrainSGH1, a Bacterioruberin-Rich, Perchlorate-Tolerant Halophilic Archaeon Isolated From Halite Microbial Communities, Atacama Desert, Chile”. Nataly Flores1, Sebastian Hoyos1, Mauricio Venegas1, Alexandra Galétovic1, Lidia M. Zúñiga1, Francisca Fábrega1, Bernardo Paredes1, Camila Salazar-Ardiles1, Claudia Vilo1, Carmen Ascaso2, Jacek Wierzchos2, Virginia Souza-Egipsy3, Jorge E. Araya4, Ramon Alberto Batista-García5 and Benito Gómez-Silva1* 1 Laboratory of Biochemistry, Biomedical Department and Centre for Biotechnology and Bioengineering, Universidad de Antofagasta, Antofagasta, Chile. 2 Department Biogeochemistry and Microbial Ecology, National Museum of Natural Sciences – Spanish National Research Council, Madrid, Spain. 3 Department of Macromolecular Physics, Institute of Material Structure – Spanish National Research Council, Madrid, Spain. 4 Laboratory of Parasitology Department of Medical Technology and Centre for Biotechnology and Bioengineering, Universidad de Antofagasta, Antofagasta, Chile. 5 Centro de Investigación en Dinámica Celular, Instituto de Investigación en Ciencias Básicas y Aplicadas, Universidad Autónoma del Estado de Morelos, Cuernavaca, México.
Código DOI: 10.1016/j.micinf.2016.08.003 Publicación: “Decreased cruzipain and gp85/trans-sialidase family protein expression contributes to loss of Trypanosoma cruzi trypomastigote virulence”. San Francisco J, Barría I, Gutiérrez B, Neira I, Muñoz C, Sagua H, Araya JE, Andrade JC, Zailberger A, Catalán A, Remonsellez F, Vega JL, González J. Microbes Infect. 2017 Jan; 19(1):55-61.
Código DOI: 10.4269/ajtmh.17-0293 Publicación: “Trypanosoma cruzi Infection Induces Pannexin-1 Channel Opening in Cardiac Myocytes”. Barría I, Güiza J, Cifuentes F, Zamorano P, Sáez JC, González J, Vega JL. Am J Trop Med Hyg. 2018 Jan; 98(1):105-112.
Código DOI: 10.1016/j.micinf.2016.08.003 Publicación: “Decreased cruzipain and gp85/trans-sialidase family protein expression contributes to loss of Trypanosoma cruzi trypomastigote virulence”. San Francisco J, Barría I, Gutiérrez B, Neira I, Muñoz C, Sagua H, Araya JE, Andrade JC, Zailberger A, Catalán A, Remonsellez F, Vega JL, González J. Microbes Infect. 2017 Jan; 19(1):55-61.
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